Tez detayları

Amino benzohidrazid türevi moleküller kullanılarak karaturp peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması = Purification of the peroxidase enzyme with afinite chromatography technique using aamino benzohydrazide derivative molecules

Yazarlar:

Koçak, Şeyma Mehtap

Yayıncı:

Atatürk Üniversitesi

Ana Başlıklar:

Biyokimya

Belge Tipi:

Tezler

Program Tipi:

Yüksek Lisans

Yayın Tarihi:

12/2017

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000218643

Anahtar sözcükler:

Biyokimya

Özet

In this thesis, it is aimed to contribute to the purification studies of plant peroxidaseenzymes 4-amino 2-nitrobenzohydrazide, 4-amino 3-nitrobenzohydrazide, 4-amino 2-bromobenzohydrazide and 4-amino 3-bromobenzohydrazide molecules was synthesizedas a ligand and was used for the purification of peroxidase enzymes from radish roots. 4amino benzohydrazide molecules was synthesized from methly benzoate form to obtainbenzohydrazide molecules and effects of inhibition on the black radish POD enzymewere studied. Sepharose-4B-L-Tyrosine gel material was synthesized by binding tomolecules displaying alternating inhibition effect, and purification of the single-stepPOD enzyme was performed. When 4-amino 2-bromo benzohydrazide was used as aligand for the black radish POD enzyme was purified 258 fold with a yield of 28.5%, 4-amino 3-bromo benzohydrazide 677 fold with a yield of 31.4%, 4-amino 2-nitrobenzohydrazide 613.3-fold with yield of 33%, 4-amino 3-nitro benzohydrazide365,6 fold with yield of 7,5%. Molecular weight was controlled by purity of thepurified enzymes by SDS-PAGE. Single band at 43-47 kDa was observed for the blackradish POD enzyme. Column retention capacity for Sepharose-4B-L-Tyrosine-4-amino-3-bromo benzohydrazide column was studied on different pH, temperature, ionicstrengths for black radis POD enzymes. Optimum conditions for black radish PODenzyme was calculated as a pH 7.5, temperature 15 ° C, ionic strength 0.30 M.

Bu tez kapsamında bitki peroksidaz enzimlerinin saflaştırma çalışmalarına katkısağlamak amacı ile 4-amino 2-nitro benzohidrazid, 4-amino 3-nitro benzohidrazid, 4-amino 2-bromo benzohidrazid ve 4-amino 3-bromo benzohidrazid molekülleri ligantolarak sentezlendi ve karaturp köklerinden peroksidaz enzimlerinin saflaştırılmasındakullanıldı. 4-amino benzohidrazid molekülleri metilbenzoat formlarından hidrazinsentezleri yapılarak karaturp POD enzimi üzerine inhibisyon etkileri incelendi.Sepharose-4B-L-Tirozin jel materyali, dönüşümlü inhibisyon gösteren moleküllerebağlanarak afinite jelleri sentezlendi ve tek kademede karaturp POD enzimininsaflaştırılması gerçekleştirildi. 4-amino 2-bromo benzohidrazid molekülükullanıldığında POD enzimi, karaturptan %28,5 verimle 258 kat, 4-amino 3-bromobenzohidrazid ile karaturptan %31,4 verimle 677 kat, 4-amino 2-nitro benzohidrazid ilekaraturptan %33,8 verimle 613,3 kat, 4-amino 3-nitro benzohidrazid ile karaturptan%7,5 verimle 365,6 kat saflaştırıldı. Saflaştırılan enzimlerin saflığı ile molekül ağırlığıSDS-PAGE ile kontrol edildi. Karaturp POD enzimi için 43-47 kDa'da tek bantgözlendi. Sepharose-4B-L-Tirozin-4-amino-3-bromo benzohidrazid kolonu için kolontutma kapasitesi, karaturp POD enzimleri için değişik pH, sıcaklık, iyonik şiddetlerdeçalışıldı. Karaturp POD enzimi için optimum şartlar: pH 7,5, sıcaklık 15°C, iyonikşiddet 0,30 M olarak hesaplandı.

Tez detayları

Amino benzohidrazid türevi moleküller kullanılarak karaturp peroksidaz enziminin afinite kromatografisi tekniği ile saflaştırılması = Purification of the peroxidase enzyme with afinite chromatography technique using aamino benzohydrazide derivative molecules

Yazarlar: Koçak, Şeyma Mehtap

Yayıncı: Atatürk Üniversitesi

Ana Başlıklar: Biyokimya

Belge Tipi: Tezler

Program Tipi: Yüksek Lisans

Yayın Tarihi: 12/2017

Belge Dili: Türkçe

Document ID (Org No.): 2000218643