Recent investigations describing stationary phases containing embedded polar groups have shown the superior performance of these new phases over conventional C8 and C18 phases for alkaline analytes. The polar groups, particularly amide, were originally chosen for their ability to interact with alkaline nalytes. İn addition, the amide phases have shown enhanced polar groups show different selectivities and are less retentive, requiring a mobile phase with a lower concentration of organic solvent (Ascah and at all. 1996).In this study new stationary phases that were made of two silica-based amide derivative were synthezied starting from either N-Boc-phenylalanine and N-Boc-Glutamine aminoacids, cyclohexylamine or aniline and spherical silica gel (4µm, 60 Å). Two new amide compounds were obtained by interacting N-Boc-phenilalanine with cyclohexylamine and N-Boc-Glutamine with aniline in exist of DCC. Then boc group was removed using TFA/CH3COOH. Resulted amides were reacted either using with spherical silica gel modified with 3-chloropropyletrimetoxisilane or 3-glysidyoxipropyltrimetoxisilane yielded SP1 and SP2. The resulting amide bonded stationary phases were characterised by SEM, IR and elemental analysis. Two stationary phases were given HPLC columns with conventional slurry packing method. Optimization studies towards mobile phase content, pH, mobile phase concentration, flow rate and temperature were made to observe properties of stationary phases and their seperation efficiency. İt was determined that SP1 towards especially plant growth regulators and SP2 towards especially nucleosides and nukleotides showed enhanced performance race percentage with supply commercial columns.

Son zamanlarda yapılan çalışmalara bakıldığında polar gruplar içeren dolgu maddeleriyle yapılan çalışmaların, bu dolgu maddelerinin yaygın olarak kullanılan geleneksel fazlar olan C8 ve C18 fazlarına göre bazik analitlere karşı çok daha iyi ayırma sağladığını göstermiştir. Polar gruplar, özellikle amidler, bazik analitlerle güçlü etkileşim yapabilmelerinden dolayı tercih edilir. Ayrıca amid grubu içeren dolgu fazları, düşük molekül ağırlıklı asitlere karşı da üstün bir seçicilik gösterir (Ascah ve ark. 1996).Bu çalışmada iki adet silika tabanlı amid türevi yeni dolgu maddesi elde edildi. Bu amitlerden birisi N-Boc-Fenilalanin, sikloheksil amin ve küresel silika jel (4mµ, 60 Å); diğeri ise N-Boc-Glutamin, anilin ve küresel silika jel (4mµ, 60 Å) kullanılarak elde edildi. Her iki sentezin ilk basamağı (amit sentezi) DCC ortamında gerçekleştirildi. Daha sonra her iki amid bileşiğinin boc grubu TFA/CH3COOH ortamında kaldırıldı. Bunlardan N-Boc-Fenilalanin ve siklohekzilaminden elde edilen boc grubu kaldırılmış bileşik 3-kloropropiltrimetoksisilan (CPTMS) ile uyarlanmış küresel silika jel ile etkileştirilerek SP1 kodlu dolgu fazı hazırlandı. Öte yandan N-Boc-Glutamin ve anilinden elde edilen boc koruyucu grubu kaldırılmış bileşik 3-glisidiloksipropiltrimetoksisilan (GPTMS) ile etkileştirildi ve daha sonra küresel silika jel ile reaksiyona sokularak SP2 kodlu dolgu fazı hazırlandı. Her iki dolgu maddesinin yapısı element analizi, SEM ve IR ile tayin edildi. Bu dolgu fazları geleneksel bulamaç paketleme metodu ile yüksek basınç altında HPLC boş kolonuna dolduruldu. Kolonlar on üç bitki büyüme düzenleyicisi, on bir fenolik bileşik, on sübstitüe anilin, çeşitli nükleotid ve nükleozitler ve sudan boyalarının ayrılmasında kullanıldı. Dolgu maddelerinin özelliklerini ve ayırma gücünü incelemek için mobil faz içeriği, pH, tampon derişimi, akış hızı, sıcaklık gibi şartlara karşı ayrıntılı optimizasyon çalışmaları yapıldı. SP1'in özellikle bitki büyüme düzenleyicilerine karşı SP2'nin de nükleotid ve nükleozidlere karşı piyasadaki mevcut ticari kolonlarla yarışacak ölçüde performans gösterdiği tespit edildi.