Tez detayları

Isolation, expression and characterization of an ?-L-arabinofuranosidase enzyme from thermophilic Geobacillus sp. = Thermophilic Geobacillus türünden ?-L-arabinofuranozidaz enziminin izole edilmesi, ifadelenmesi ve karakterize edilmesi

Yazarlar:

İlgü, Hüseyin

Yayıncı:

İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü

Ana Başlıklar:

Biyokimya

Belge Tipi:

Tezler

Program Tipi:

Yüksek Lisans

Yayın Tarihi:

12/2010

Belge Dili:

İngilizce

Document ID (Org No.):

2000144894

Anahtar sözcükler:

Biyokimya

Özet

In our study, we have aimed first to isolate an ?-L-arabinofuranosidase (ALAF)enzyme, 58.0 kDa, from a thermophilic organism; Thermophilic Geobacillus sp. by usingmolecular cloning techniques, then to characterize this enzyme via biochemical methods.Throughout the characterization studies, we have investigated the optimumconditions for the highest enzyme activity by means of pH and temperature by using pNP-?-L-arabinofuranoside as substrate. Also, effect of various metal ions, some specificchemicals and common organic solvents on enzyme activity was studied. Due to the factthat ?-L-arabinofuranosidases mainly hydrolyze ?-L-arabinofuranosyl residues of Larabinosecontaining polysaccharides, enzyme activity towards sugar beet arabinan wasalso studied. Our enzyme exhibited activity in a broad pH range between pH 3.0-10.0 at50?C and between 30-90?C in Na-acetate buffer pH 5.0. Optimum activity towards pNP-?-L-arabinofuranoside was obtained at pH 5.0 and at 70?C. Kinetic studies showed that ourenzyme has a Km value as 0.19 mM and Vmax as 18.6 AAbs/min/ml towards pNP-?-Larabinofuranosideand Km value as 0.1 mM and Vmax as 8.1 AAbs/min/ml towards sugarbeet arabinan.

Bu çalısmada, termofilik bir organizma olan Thermophilic Geobacillus türünden,moleküler klonlama teknikleri kullanılarak ?-L-arabinofuranozidaz (?-L-AbFase)enziminin izolasyonu ve sonrasında biyokimyasal yöntemlerle karakterizasyonuamaçlanmıstır.Karakterizasyon çalısmaları sırasında, enzimin pNP-?-L-arabinofuranozitsubstratına karsı en yüksek verimde çalıstığı optimum pH ve sıcaklığı değerleriniarastırdık. Buna ek olarak, çesitli metal iyonlarının, bazı özel kimyasallar ve yaygınkullanımı olan organik çözgenlerin enzim aktivitesi üzerine olan etkileri çalısıldı.Çalıstığımız enzimin ana olarak L-arabinoze içeren polisakkaritlerde ?-L-arabinofuranozilgruplarını parçalamasından dolayı pancar sekerinden elde edilmis olan arabinan susbtratolarak kullanılmıstır . Enzimimiz, 50?C sıcaklıkta genis bir pH aralığında; pH 3.0-10.0, veNa-asetat tamponu içinde iken 30 ile 90?C arasında aktivite göstermis olup, pNP-?-Larabinofuranozitsubstratına karsı optimum çalısma kosulları pH 5.0 ve 70?C olaraksaptanmıs, kinetik çalısmalar sonrasında enzimin bu substrata karsı Km ve Vmax değerlerisırasıyla 14.75 mM ve 1.6 Abs/dak/ml olarak, seker pancarından elde edilmis arabinanakarsı ise sırasıyla 1.35 mM ve 3.9 AAbs/dak/ml olarak hesaplanmıstır.

Tez detayları

Isolation, expression and characterization of an ?-L-arabinofuranosidase enzyme from thermophilic Geobacillus sp. = Thermophilic Geobacillus türünden ?-L-arabinofuranozidaz enziminin izole edilmesi, ifadelenmesi ve karakterize edilmesi

Yazarlar: İlgü, Hüseyin

Yayıncı: İzmir Yüksek Teknoloji Enstitüsü

Ana Başlıklar: Biyokimya

Belge Tipi: Tezler

Program Tipi: Yüksek Lisans

Yayın Tarihi: 12/2010

Belge Dili: İngilizce

Document ID (Org No.): 2000144894