Tez detayları

Generation of novel random mutagenesis lipase libraries via directed evolution = Yönlendirilmis¸ evrim metodu ile yeni, rastgele mutasyona uğratılmış lipaz kütüphanelerinin oluşturulması

Yazarlar:

Yenilmez, Batuhan Orbay

Yayıncı:

Sabancı Üniversitesi

Ana Başlıklar:

Yaşam bilimleri

Belge Tipi:

Tezler

Program Tipi:

Yüksek Lisans

Yayın Tarihi:

12/2012

Belge Dili:

İngilizce

Document ID (Org No.):

2000009568

Anahtar sözcükler:

Biyoteknoloji

Özet

Lipases (triacylglycerol acylhydrolases, EC 3.1.1.3) function as significant biocatalysts in biotechnological applications. The fact that their mechanism, selectivity and structure is well known make lipases a suitable candidate for studies of protein engineering and directed evolution. Using the merits of DNA shuffling method, directed evolution and random mutagenesis,libraries of mutant lipases are constructed with improved features and functionality of pre-existing ones, which in turn encourages the use of industrial lipases in applications such as biosensors, pharmaceuticals, agrochemicals, bioremediation, etc. With increasing demand on lipase production for commercial use, it has thus become crucial to identify and isolate novel and target-specific lipases, as well as optimizing existing ones for acquisition of desired functionality. The aim of this study is to generate mutant lipase libraries using directed evolution and to screen for a candidate biocatalyst. There are two lipases of interest, the mesophilic Aspergillus niger lipase (ANL) and the thermophilic Bacillus thermocatenulatus lipase (BTL), which were shuffled in order to obtain a mutant library that would have the desired features such as increased thermostability, pH stability and a broader range of substrate specificity.

Lipazlar (triasilgliserol asilhidrolaz EC 3.1.1.3), biyoteknolojik uygulamalarda etkili rol oynayan biyokatalizörlerdir. Mekanizmaları, seçicilikleri ve yapıları bilindiği için, protein mühendisliği ve yönlendirilmiş evrim metodlarına uygun adaylardır. DNA karma metodu, yönlendirilmiş evrim ve rastgele mutajenez tekniklerinin bir arada kullanılabilmesi, istenilen özelliklere sahip mutant lipaz kütüphanelerinin oluşturulabilmesine imkan tanımıştır. Bu durum, lipazlarin aynı zamanda biyosensör, ilaç, tarım endüstrilerinde kullanılmasına olanak sağlamıştır. Lipazların ticari kullanımına karşı artan talep sonucu yeni ve hedefe özgün lipazların tanımlanması ve izole edilmesi kritik önem taşımaktadır. Bu tez, yönlendirilmiş evrim tekniğiyle mutant lipaz kütüphanelerinin oluşturulmasını hedef almakla beraber, aday biyokatalizörlerin analizini yapmayı amaçlamaktadır. Bunun için, fungal ve mezofilik bir lipaz olan Aspergillus niger lipazı (ANL) ile bakteriyel ve termofilik bir lipaz olan Bacillus thermocatenulatus lipazı (BTL) DNA karma metodu ile karıştırılmıştır. Rastgele mutajene olacak olan enzimlerin, termostabilite, pH stabilite ve substrat seçiciliğinde artı göstermesi ve endüstriyel ve biyokteknolojik uygulamalarda önemli bir lipaz olması öngörülmektedir. Elde edilen klonlarda, substrat seçiciliği değişikliği görülmemekle beraber, enzimlerin genel aktivitelerinde belirli değişiklikler saptanmış, ve bu özellikler yapısal boyutta tartışılmıştır.

Tez detayları

Generation of novel random mutagenesis lipase libraries via directed evolution = Yönlendirilmis¸ evrim metodu ile yeni, rastgele mutasyona uğratılmış lipaz kütüphanelerinin oluşturulması

Yazarlar: Yenilmez, Batuhan Orbay

Yayıncı: Sabancı Üniversitesi

Ana Başlıklar: Yaşam bilimleri

Belge Tipi: Tezler

Program Tipi: Yüksek Lisans

Yayın Tarihi: 12/2012

Belge Dili: İngilizce

Document ID (Org No.): 2000009568