ABSTRACT CORRELATION OF c-erbB-2 (HER-2/neu) EXPRESSION AND AMPLIFICATION WITH OTHER PROGNOSTIC FACTORS IN BREAST CARCINOMA Several factors have been identified in breast carcinoma which affect the biologic behavior, therapy and the prognosis of the tumor. Among these, c-erbB-2 ( HER-2/neu) oncogene encodes a transmembrane tyrosine kinase receptor with extensive homology to the Epidermal Growth Factor receptor. In the literature, studies regarding the prognostic role of c- erbB-2 oncoprotein overexpression and gene amplification with and without other parameters is controversial. Immunohistochemistry, PCR, Southern Blot, Northern Blot, Western Blot analyses, ELISA and FISH are the methods of detecting c-erbB-2 abnormalities. In this study, paraffin sections from 60 female breast samples were analyzed. Immunohistochemistry was used to detect estrogen status and c-erbB-2 protein expression whereas differential PCR was used to detect c-erbB-2 gene amplification. Differential PCR is an alternative semi-quantitative method for evaluating gene amplification and can be performed in formalin-fixed paraffin-embedded specimens. We compared the prognostic impact of c-erbB-2 gene amplification and protein overexpression with conventional prognostic factors (age, histologic type and size of the tumor, grade, lymphatic invasion, lymph node involvement and estrogen status). In our study, a highly significant degree of concordance (p=0.000) between c-erbB-2 amplification and overexpression was observed. Our results also showed that c-erbB-2 expression and gene amplification in breast carcinoma is significantly related to the number of metastatic lymph nodes (p=0.003), poor histologic grade (p=0.000) and lymphatic invasion (p=0.003). Age, histologic type, tumor size and estrogen status did not correlate with c-erbB-2 status in our study. Our study confirmed the importance of c-erbB-2 overexpression and gene amplification as a single and combined prognostic parameter together with conventional factors and can be detected by both immunohistochemistry and differential PCR techniques. Differential PCR technique provides semi-quantitative, reliable results and can be use routinely. Key words: c-erbB-2,, immunohistochemistry, breast carcinoma, PCR, prognostic factors vn.

ÖZET MEME KARSİNOMUNDA c-erbB-2 ( HER-2/neu) EKSPRESYON VE AMPLİFİKAYONUNUN DİĞER PROGNOSTÎK FAKTÖRLERLE KARŞILAŞTIRILMASI Meme karsinomunda, tümörün biyolojik davranışım, tedavi ve prognozunu belirleyen çeşitli parametreler tanımlanmıştır. Bunların içerisinde c-erbB-2 (HER-2/neu), Epidermal büyüme faktör reseptörüne benzeyen, hücre membranında tirozin kinaz reseptörünü kodlayan bir onkogendir. Meme karsinomlannda, c-erbB-2 onkoprotein ekspresyonunun ve gen amplifikasyonunun, tek başına ve diğer parametreler ile birlikte prognostik önemi konusunda, yayınlarda farklı sonuçlar mevcuttur. İmmünohistokimya, PCR, Southern Blot, Northern Blot, Western Blot, ELISA, FISH gibi yöntemler c-erbB-2'nin tespitinde kullanılmaktadır. Bu çalışmada 60 adet meme karsinomlu kadın hastaya ait parafin doku örnekleri incelenmiştir. Parafin kesitlerde östrojen reseptörü ve c-erbB-2 protein ekspresyonu immünohistokimyasal teknik, c-erbB-2 geninin amplifikasyonu ise karşılaştırmalı PCR yöntemi ile saptanmıştır. Karşılaştırmalı PCR, formalinle tespitli parafin dokulara uygulanabilen, gen amplifikasyonunu tespit eden, semikantitatif, alternatif bir yöntemdir, c- erbB-2 ekspresyonu ve amplifikasyonu diğer klasik prognostik faktörlerle (hasta yaşı, tümörün histolojik tipi, çapı, grade'i, lenfovasküler invazyon, lenf nodulu tutulumu ve sayısı, östrojen reseptör varlığı) karşılaştırılmıştır. Bu çalışmada, her iki yöntemle tespit edilen c- erbB-2 amplifikasyonu ve ekspresyonu arasında istatistiksel olarak anlamlı bir ilişki bulunmuştur p=0,000). Meme karsinomunda, c-erbB-2 amplifîkasyon ve ekspresyonunun artmış metastatik lenf nodulu sayısı (p=0,003), yüksek histolojik grade (p=0,000), lenfovasküler invazyon (p=0,003) arasında istatistiksel olarak anlamlı ilişki gösterilmiştir. Ancak, hasta yaşı, tümörün histolojik tipi, çapı ve östrojen reseptör varlığı ile anlamlı bir ilişki saptanmamıştır (p>0,05) Çalışmamızda, meme karsinomunda, tek başına ve konvansiyonel prognostik faktörler ile birlikte c-erbB-2 ekspresyonu ve gen amplifikasyonunun önemli bir parametre olarak değerlendirilmesi gerekliliği, bu amaçla immünohistokimyasal tekniğin yam sıra, karşılaştırmalı PCR'ın semikantitatif sonuç veren, güvenilir bir yöntem olarak, rutin uygulamada yer alabileceği sonucuna varılmıştır. Anahtar sözcükler: c-erbB-2, İmmünohistokimya, meme karsinomu, PCR, prognostik faktörler VI.