The reliable detection and quantification of Genetically Modified Organisms (GMO) is strongly dependent on validated methods as well as calibration systems. Today, Certified Reference Materials are used as reliable source of template DNA in quantitative real-time PCR assays constructing validated methods for routine analysis of GMOs. In addition to that, obtaining and assessing plasmids for use as real-time PCR standards and positive PCR controls are increasingly used methodologies. To enforce the labeling regulations of GMOs, the application of DNA plasmids as calibrants is becoming essential for the practical quantification of GMOs. This study reports the construction of plasmids for qualitative screening assay for 35S promoter and NOS terminator as GMO elements, and relative quantification assays in Maize and Soya events, Bt11 and GTS 40-3-2 respectively.Reference GM plasmids provided convenient and reliable positive controls for GM PCR tests. Soya GM event GTS 40-3-2 and endogenous control plasmids assessed within-laboratory assays were resulted to be acceptable in terms of reproducibility standard deviation and repeatability relative standard deviation. As a result of verification and measurement uncertainty data based on single laboratory data, constructed plasmids provided an excellent and economic alternative to plant DNA extractions for positive control material. However, further study is needed showing enhanced amplification efficiency and inter-laboratory verification data for using constructed plasmids as template DNA in validated methods.

Genetiği değiştirilmiş organizmaların (GDO) tespiti ve kantitasyonunun güvenirliği için valide edilmiş metotların kullanımı kalibrasyon sistemlerinin oluşturulması esastır. Günümüzde bu amaçla yoğunlukla kullanılan gerçek zamanlı kantitatif PCR tabanlı rutin analizler için bu valide metotların oluşturulması sertifikalı referans materyallerin DNA'sı kullanılarak yapılmaktadır. Gerçek zamanlı PCR analizlerinde genomik DNA'nın yerine plazmit DNA'nın kalibrasyon standardı ve pozitif kontrol olarak kullanımı giderek artmaktadır. Bu çalışmada, kalitatif tespit için 35S promotör ve NOS terminatör gen bölgeleri; kantitatif analiz için mısırda Bt11 ve soyada GTS 40-3-2 GDO çeşidine yönelik plazmitler oluşturulmuştur.Oluşturulan plazmitlerle elde edilen sonuçlar, bu plazmitlerin PCR analizleri için kullanımı konusunda bazı avantaj ve dezavantajlarını göstermektedir. Referans GDO plazmitlerinin GDO'ya yönelik PCR analizleri için kullanışlı ve güvenilir birer pozitif kontrol DNA olduğu ortaya konmuştur. Çalışmada GTS 40-3-2 soya türü ve soyaya özgü Le1 için oluşturulan plazmitlerin kantitasyon amaçlı ölçüm belirsizliği açısından kabul edilebilir değerlerde olduğu görülmektedir. Sonuç olarak, laboratuvar içi ölçüm belirsizliği verilerine göre referans plazmitler bitki genomik DNA muadillerine nazaran ekonomik ve hatta kullanılabilirlik açısından da daha kolay çözüm sunabileceğine dair gösterge niteliğindedir. Yapılan çalışmanın valide olabilmesi açısından ileriki aşamalarda amplifikasyon verimliliğinin geliştirilmesi ve laboratuvarlar arası karşılaştırmalı testlerin gerçekleştirilmesine ihtiyaç duyulmaktadır.