Cryptochrome (CRY) proteins function as a photoreceptor or a component in the core circadian clock. Light exposure opens the C-terminus of Drosophila CRY (dCRY), which is normally bent towards the FAD-binding domain. This opening makes the masked surface of the FAD-binding domain accessible to JETLAG (JET) and TIMELESS (TIM) proteins for binding. The binding of these proteins to dCRY starts a signaling cascade resulting in the degradation of TIM and CRY TIM degradation resets the clock while CRY degradation gates the resetting of the clock by disrupting the photoreceptor function.The C-terminus of dCRY is important for photoreception because its deletion generates a constitutively active form causing arrhythmicity in flies. To determine the flexibility of the C-terminus, we replaced the C-terminus of dCRY with C-termini of Type1, 2, and 4 CRYs from different organisms. Then we expressed these chimeric dCRY variants in fruit fly cell line S2R+. In this cell line, expressed dCRY can be degraded by the proteasome pathway following light exposure and this degradation is followed by immunoblot technique. We measured the light activated degradation of chimera.We found that the replacement of C-terminus of dCRY with the C-termini from very distant CRYs, even from Type2 CRYs, can support the light-dependent proteolysis of dCRY. We also found that the mutation of an arginine residue in the C-terminus of dCRY, which is conserved in all types of CRYs, does not interfere with the light-dependent proteolysis of dCRY. These findings suggest that C-terminus is very flexible for the light-dependent function(s).

Kriptokrom (CRY) proteinleri, sirkadiyen saatte fotoreseptör ya da çekirdek osilatör mekanizmasının bir parçası olarak işlev görür. Drosophila CRY (dCRY) proteini ışığa mazur kalınca, normalde FAD-bağlama alanına doğru kıvrılarak protein gövdesine yapışık olarak kapalı olan C-terminal ucu gevşeyerek açılır. FAD-bağlanma alanının C-terminalce maskelenmiş yüzeylerinin açılmasıyla JETLAG (JET) ve TIMELESS (TIM) proteininlerine bağlanmasını sağlar. Bu proteinlerin dCRY'ye bağlanması bir sinyal kaskadı başlatır. TIM degradasyonu saati sıfırlarken, CRY bozulması ise fotoreseptörün ortadan kaldırılmasıyla saatin sıfırlanmasını sağlar.dCRY'nin C-terminali fotoreseptör fonksiyonu için önemlidir. Çünkü C-terminalin silinmesi, sineklerde aritmiye neden olan konstitütif aktif bir form oluşturur. dCRY'nin C-terminalinin esnekliğini belirlemek için, dCRY'nin C-terminalini farklı organizmalardan Tip1, 2 ve Tip 4 CRY'leriyle değiştirdik. Daha sonra meyve sinek hücre hattı S2R+'daki bu rekombinant kimerik dCRY varyantlarını eksprese ettik. Bu hücre hattında, eksprese edilen dCRY, ışığa maruz kalmanın ardından proteazom yolağı tarafından degrade edilebilir ve bu rekombinant dCRY üzerindeki etiketlere karşı antikorlar kullanılarak immünoblot tekniği ile takip edilir. Kimeraların ışıkla aktive olan degradayonunu ölçtük.Uzak akraba CRY'lerin C-terminallerinin, Tip2 CRY'ler de bile dCRY'nin ışık-bağımlı proteolizi destekleyebildiğini gösterdik. CRY'nin tiplerinde korunmuş olan Arjinin amino asidinin mutasyonunun bile dCRY'nin ışık-bağımlı proteolizini engellemediğini de bulduk. Bu bulgular C-terminalin ışık-bağımlı fonksiyon(ları) için çok esnek olduğunu göstermektedir.