Tez detayları

Isolation, purification and characterization of catalase from Phanerochaete Chrysosporium = Katalaz enziminin Phanerochaete Chrysosporium dan izolasyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

Yazarlar:

Kavakçioğlu, Berna

Yayıncı:

Dokuz Eylül Üniversitesi

Ana Başlıklar:

Biyokimya

Belge Tipi:

Tezler

Program Tipi:

Yüksek Lisans

Yayın Tarihi:

12/2011

Belge Dili:

İngilizce

Document ID (Org No.):

2000295870

Anahtar sözcükler:

Biyokimya

Özet

Catalase is one of the antioxidant enzymes that plays a major role in the protection of the cells and the tissues from the toxic effects of hydrogen peroxide.In this study, 129.10-fold catalase enzyme purification was obtained from white rot fungus Phanerochaete chrysosporium by 60 percentage ammonium sulphate precipitation, 60 percentage ethanol precipitation, DEAE-cellulose anion exchange and by applyingsephacryl-s-200 gel filtration chromatography as a final purification step. The molecular weight of purified catalase was found about 290 kDa with gel filtration chromatography. SDS-gel electrophoresis results indicated that Phanerochaete chrysosporium catalase consists of four apparently identical subunits, with a molecular weight of around 72 kDa. Optimum pH and the temperature values of the purified catalase was found as 7.5 and 30 celcius, respectively. It was found that purified catalase was more stable in the basic region and it lost its catalitic acitivity about 25 percentage at 60 celcius. The Km and Vmax values were found as 290.69 mM and 250000 U/mg respectively for the purified catalase. It was not observed that imazolyl and procymidon had inhibition effects on purified catalase. However, it was found that benomyl inhibited purified catalase as non-competitive inhibitor and Ki value was determined as 1.158 mM.

Katalaz, hücre ve dokuların hidrojen peroksidin toksik etkilerinden korunmasında temel rol oynayan antioksidan enzimlerden biridir.Çalışma kapsamında, yüzde 60 amonyum sülfat çöktürmesi, yüzde 60 etanol çöktürmesi, DEAE selüloz anyon değiştirici kromatografisi ve son saflaştırma basamağı olarak da sephacryl- s-200 jel filtrasyon kromatografisi uygulanarak beyaz çürükçül fungus Phanerochaete chrysosporium katalazı 129,10 kat saflaştırılmıştır. Saflaştırılmış katalazın moleküler ağırlığı jel filtrasyonu ile yaklaşık 290 kDa olarak bulunmuştur. SDS-PAGE jel elektroforezi saflaştırılmış enzimin 72 kDa ağırlığında dört eşdeğer subunitten oluştuğunu göstermiştir. Saflaştırılmış enzimin optimum pH değeri 7,5 ve optimum sıcaklığı 30 derece olarak bulunmuştur. Enzim bazik bölgede daha stabil olup 60 derece 2 saat sonunda yaklaşık yüzde 25 aktivite kaybına uğramıştır. Saflaştırılmış katalaz için Km ve Vmax değerleri sırasıyla 290,69 mM ve 250000 U/mg olarak bulunmuştur. İmazalil ve procymidon fungusitleri saflaştırılmış katalaz aktivitesini inhibisyona uğratmazken benomil fungusitinin yarışmasız inhibitör etkisine sahip olduğu belirlenmiş ve Ki değeri 1,158 mM olarak bulunmuştur.

Tez detayları

Isolation, purification and characterization of catalase from Phanerochaete Chrysosporium = Katalaz enziminin Phanerochaete Chrysosporium dan izolasyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu

Yazarlar: Kavakçioğlu, Berna

Yayıncı: Dokuz Eylül Üniversitesi

Ana Başlıklar: Biyokimya

Belge Tipi: Tezler

Program Tipi: Yüksek Lisans

Yayın Tarihi: 12/2011

Belge Dili: İngilizce

Document ID (Org No.): 2000295870