Kriyoprezervasyon Uygulanmış Balık Sperm Hücrelerinde DNA Hasarının Tespitinde Farklı Comet Analizi (Tek Hücre Jel Elektroforezi) Metotlarının Uygulanmaları

Burak Evren İnanan; Nazlı Yıldırım; Ekin Demirkaya

Makale detayları

Kriyoprezervasyon Uygulanmış Balık Sperm Hücrelerinde DNA Hasarının Tespitinde Farklı Comet Analizi (Tek Hücre Jel Elektroforezi) Metotlarının Uygulanmaları

Yazarlar:

Burak Evren İnanan | Nazlı Yıldırım | Ekin Demirkaya

Yayıncı:

İlker ÇAMKERTEN

Ana Başlıklar:

Yaşam bilimleri | Ekoloji

Dergi:

Journal of Advances in VetBio Science and Techniques 2016 Vol.1 Issue 1, pp.6-13

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

12/2016

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000489146

Sıklık:

Üç Yıllık

eISSN:

2548-1150

Özet:

 


Cryopreservation
as an assisted reproduction method is commonly used for successful long-term
storage of not only human but also animal gametes, even their embryos.
Moreover, cryopreservation of sperm offers many advantages. In fish, for
instance, it is useful for improving artificial reproduction, facilitating
genetic manipulation, and reducing the amount of male breeders stocks. However,
after cryopreservation, sperm cell could have some problems such as loss in
motility and DNA damage, leading to lower fertilization and hatching rates. The
comet assay is a simple, but sensitive tool for detecting strand breaks in DNA
in single sperm cells. In this study, three comet assay methods which contain
different chemical agents and have different application times were carried out
on fish sperm. The mixed sperm samples obtained from mature carp (Cyprinus carpio) males were used in the
experiments. Firstly, using fresh sperm samples, DNA damage is classified by
means of lysis solutions of each used method without H2O2
and with 12, 25 and 50 µM H2O2. Thus, DNA damage is
visually scored by measuring the DNA tail of each sperm cell in ﬂuorescent microscope
images as positive control (undamaged DNA), 1, 2, and 3 classes of damage,
referring from the less to more damaged sperm cells. Secondly, after thawing,
cryopreserved sperm samples were applied by the comet assay methods. The
results of three methods have shown no significant differences among the
percentages of undamaged DNA (67.7±2.0 %, 69. 3±1.8 % and 68.2±2.8 %) and total
damaged DNA (32.3±2.0 %, 30.7±1.8 % and 31.8±2.8 %) of sperm cells as. On the
contrary, there were some statistical differences among the classes of damage.
Consequently, all methods have been found successful in detection of undamaged
and total damaged DNA but not in the recognition of the damage classes.

.

 


Kriyoprezervasyon,
hem insan hem de hayvan gametlerinin, hatta embriyolarının, başarılı bir
şekilde uzun süreli saklanması için yaygın olarak kullanılan yardımcı üreme
tekniklerindendir. Ayrıca, sperm kriyoprezervasyonun birçok avantajı vardır.
Örneğin, balıklarda suni döllemenin geliştirilmesinde, genetik
manipülasyonların kolaylaştırılmasında, erkek anaç stokunun azaltılmasında
kullanılır. Ancak kriyoprezervasyon sonrası, sperm hücrelerinde sonrasında
dölleme ve yumurtadan çıkış oranlarının azalmasına sebep olacak motilite kaybı
ve DNA hasarı gibi problemler ile oluşabilir. Comet analizi, DNA sarmalındaki
kırıkları tek bir sperm hücresi seviyesinde tespit edebilen basit ve hassas bir
araçtır. 

Bu çalışmada, farklı kimyasal maddeler ve uygulama
zamanlarına sahip üç farklı Comet analiz metodu balık sperm hücrelerine
uygulanmıştır. Olgun sazan balığı (Cyprinus carpio)  bireylerinden alınan sperm örnekleri bu çalışmada
kullanılmıştır. Öncelikle, taze sperm örnekleri kullanılarak, her metot için
liziz solüsyonuna 12, 25 ve 50 µM H2O2 eklenerek DNA
hasarı sınıflandırılmıştır. Böylece, DNA hasarı, her hücre DNA’sının
oluşturduğu kuyruk uzunluğuna göre floresan mikroskop altında incelenerek
görsel olarak, 1. 2. ve 3. dereceden hasarlı ve H2O2
eklenmemiş örnekler 0 (hasarsız) olarak ölçeklendirilebilir. Sonrasında,  kriyoprezervasyon uygulanmış sperm örnekleri
çözündürülerek, üç farklı Comet analiz metodu uygulanmıştır. Üç metoda ait
yüzde hasarsız DNA sonuçları (%67,7±2,0; % 69,3±1,8 ve %68,2±2,8)  arasında ve toplam hasarlı DNA sonuçları
(%32,3±2,0; % 30,7±1,8 ve %31,8±2,8) arasında istatistiki olarak önemli derece
fark saptanamamıştır. Buna karşın, DNA hasar sınıflandırmaları arasında bazı
istatistiksel farklılıklar bulunmaktadır. Sonuç olarak, her üç metot hasarsız
ve toplam hasarlı DNA tespitinde benzer başarıyı göstermekte iken DNA hasar
sınıflarının tanımlanmasında farklılıklar olabilmektedir.



.

Makale detayları

Kriyoprezervasyon Uygulanmış Balık Sperm Hücrelerinde DNA Hasarının Tespitinde Farklı Comet Analizi (Tek Hücre Jel Elektroforezi) Metotlarının Uygulanmaları

Yazarlar: Burak Evren İnanan | Nazlı Yıldırım | Ekin Demirkaya

Yayıncı: İlker ÇAMKERTEN

Ana Başlıklar: Yaşam bilimleri | Ekoloji

Dergi: Journal of Advances in VetBio Science and Techniques 2016 Vol.1 Issue 1, pp.6-13

Belge Tipi: Makale

Yayın Tarihi: 12/2016

Belge Dili: Türkçe

Document ID (Org No.): 2000489146

Sıklık: Üç Yıllık

eISSN: 2548-1150

Sayı

Yazarlar:

Burak Evren İnanan | Nazlı Yıldırım | Ekin Demirkaya

Yayıncı:

İlker ÇAMKERTEN

Ana Başlıklar:

Yaşam bilimleri | Ekoloji

Dergi:

Journal of Advances in VetBio Science and Techniques 2016 Vol.1 Issue 1, pp.6-13

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

12/2016

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000489146

Sıklık:

Üç Yıllık

eISSN:

2548-1150