DNA Hasar Analizinde Tek Hücre Jel Elektroforezi (Komet Yöntemi)

Ayşen DURMAZ; Nurten DİKMEN; Cumhur GÜNDÜZ

Makale detayları

DNA Hasar Analizinde Tek Hücre Jel Elektroforezi (Komet Yöntemi)

Yazarlar:

Ayşen DURMAZ | Nurten DİKMEN | Cumhur GÜNDÜZ

Yayıncı:

Cukurova University

Dergi:

Archives Medical Review Journal 2010 Vol.19 Issue 4, pp.236-243

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

11/2010

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000863211

Sıklık:

Üç Aylık

eISSN:

2602-3024

pISSN:

1300-3755

Anahtar kelimeler:

Özet:

 

"Single cell gel electrophoresis (SCGE)", also called "Comet Assay", is a sensitive, reliable and rapid technique for quantifying and analyzing DNA damage in individual cells. The comet assay is widely used in living cells, researches and the applications on comet assay is becoming broader day by day. To date, the comet assay has been used for a variety of applications, including genotoxic and cytotoxic agent analyses, environmental toxicology, cancer research, and radiation biology. Briefly, in comet assay, fully frosted microscope slides were first covered with 0.5% normal melting point agarose (NMA) and air-dried at the room temperature then cells were mixed with 0.5% low melting point agarose (LMA) at 37oC to form a cell suspension which was spread onto the slide surface and let it solidified. A third layer of 0.5% low melting point agarose was then added and again allowed to solidify. After preparing the three layer agarose the slides were immersed in lysing solution at least for an hour. The slides were then placed in an electrophoresis tank which contained neutral or alkaline buffer solution and kept in there for a short while prior to electric field application. After electrophoresis, the slides were washed with neutralization solution or PBS and stained with a DNA-specific fluorescent dye and analyzed using a fluorescent microscope.

 

Tek hücre jel elektroforezi" ya da diğer bir adıyla "Komet Yöntemi" ökaryotik hücrelerdeki DNA hasarını hücre bazında saptayabilen duyarlı, güvenilir ve hızlı bir yöntemdir. Komet yöntemi tüm canlı hücreler üzerinde yapılan çalışmalarda yaygın olarak kullanılmaktadır ve uygulama alanı her geçen gün biraz daha genişlemektedir. Günümüzde Komet yöntemi en çok genotoksik ve sitotoksik ajanların tespitinde, çevresel toksikoloji araştırmalarında, kanser araştırmalarında ve radyasyon biyolojisinde kullanılmaktadır. Komet Yönteminde ilk olarak hücreler 37oC'de %0,5'lik düşük erime noktasına sahip agaroz (LMA) ile süspanse edilip daha önceden üzeri %0,5'lik normal erime noktasına sahip agaroz (NMA) ile kaplanmış lam üzerine aktarılır. Katılaştıktan sonra 3. tabaka olarak üzerine yine %0,5'lik LMA ilave edilir. Bu üç tabakalı jel hazırlandıktan sonra hücreler lizis solüsyonu içerisinde en az 1 saat bekletilerek parçalanır. Daha sonra lam alkali ya da nötral bir tampon içeren elektroforez tankına yerleştirilip, DNA'nın açılması için bir süre beklendikten sonra elektroforez gerçekleştirilir. Elektroforez sonrasında lam, nötralizasyon tamponu ya da PBS ile yıkanıp florokrom bir boya ile boyandıktan sonra floresan mikroskop altında incelenir.

Makale detayları

DNA Hasar Analizinde Tek Hücre Jel Elektroforezi (Komet Yöntemi)

Yazarlar:

Ayşen DURMAZ | Nurten DİKMEN | Cumhur GÜNDÜZ

Yayıncı:

Cukurova University

Dergi:

Archives Medical Review Journal 2010 Vol.19 Issue 4, pp.236-243

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

11/2010

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000863211

Sıklık:

Üç Aylık

eISSN:

2602-3024

pISSN:

1300-3755

DNA Hasarı

Komet Yöntemi

Tek Hücre Jel Elektroforezi.

Sayı

Makale detayları

DNA Hasar Analizinde Tek Hücre Jel Elektroforezi (Komet Yöntemi)

Yazarlar: Ayşen DURMAZ | Nurten DİKMEN | Cumhur GÜNDÜZ

Yayıncı: Cukurova University

Dergi: Archives Medical Review Journal 2010 Vol.19 Issue 4, pp.236-243

Belge Tipi: Makale

Yayın Tarihi: 11/2010

Belge Dili: Türkçe

Document ID (Org No.): 2000863211

Sıklık: Üç Aylık

eISSN: 2602-3024

pISSN: 1300-3755

DNA Hasarı

Komet Yöntemi

Tek Hücre Jel Elektroforezi.

Sayı

Yazarlar:

Ayşen DURMAZ | Nurten DİKMEN | Cumhur GÜNDÜZ

Yayıncı:

Cukurova University

Dergi:

Archives Medical Review Journal 2010 Vol.19 Issue 4, pp.236-243

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

11/2010

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000863211

Sıklık:

Üç Aylık

eISSN:

2602-3024

pISSN:

1300-3755