β-katerin ve Axin2 proteinleri etkileşimlerinin "Proksimiti Ligasyon Assay (Yakınsal Bağlanma Tespiti)" ile görüntülenmesi

Yücel ERBİLGİN; Özden HATIRNAZ; Müge SAYİTOĞLU; Ola SÖDERBERG; Uğur ÖZBEK

Makale detayları

β-katerin ve Axin2 proteinleri etkileşimlerinin "Proksimiti Ligasyon Assay (Yakınsal Bağlanma Tespiti)" ile görüntülenmesi

Yazarlar:

Yücel ERBİLGİN | Özden HATIRNAZ | Müge SAYİTOĞLU | Ola SÖDERBERG | Uğur ÖZBEK

Yayıncı:

Istanbul University

Dergi:

Journal of Experimental Medicine 2011 Vol.1 Issue 2, pp.24-27

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

12/2011

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000429259

eISSN:

2667-5846

Özet:

 

Amaç: Sinyal yolakları ve proteinlerin fonksiyonel olarak derinlemesine çalışılmasının gerekliliği nedeni ile, proteomiks
 çalışmalarında protein-protein etkileşimlerinin analizi her geçen gün daha da önemli hale gelmektedir. Proksimiti ligasyon assay
 (PLA), hücre ve doku kesitlerinde hücre içi proteinlerin ve protein interaksiyonlanmn keşfedilmesi amacı ile kullanılan yeni
 bir yöntemdir. Bu çalışmada, PLA yöntemini kullanarak, WNT sinyal ileti yolağı proteinlerinden aktive β-katenin ve Axin2
 proteinlerinin etkileşimlerini bir T-hücreli akut lenfoblastik lösemi (T-ALL) hücre hattı olan Jurkat hücrelerinde göstermeyi
 amaçladık.
 Gereç ve Yöntem: Jurkat hücreleri RPMT lı besi yerinde yetiştirilip lamlara fikse edilir. Geçirgen hale getirilen hücreler blokaj
 aşamasından ardından birincil antikorlar ve PLA problan ile muamele edilirler. Hibridizasyon ve ligasyonunun ardından sirküle
 oligonükleotidler, sirküle dönen amplifikasyon (RCA) için substrat oluştururlar. RCA ürünleri Texas Red işaretli probların
 hibridizasyonu ile işaretlenir ve in situ PLA sinyalleri floresan mikroskobunda görüntülenir.
 Bulgular: Öncelikle hücre içi β-katenin and Axin2 protein ekspresyonlan belirlendi. Ardından aktive β-katenin-Axin2 protein
 interaksiyon varlığı hem nükleus hem de sitoplazmada gösterildi.
 Sonuç: Burada sunulan sonuçlar, in situ PLA tekniğinin, WNT yolağı üyelerinin birbirleri ile olan etkileşimlerinin hücresel
 boyutta tespit edilmesinde kullanılabileceğini göstermiştir. Çalışmamızda, aktive β-katenin-Axin2 protein etkileşimini T-ALL
 hücre soyunda (Jurkat) gösterdik. Bu WNT sinyal yolağının T-ALL de bozulmuş regülasyonuna işaret ettiğini göz önünde
 bulundurursak WNT yolağı elemanları yeni tedavi protokolleri için birer hedef molekül halini alabilirler.

Makale detayları

β-katerin ve Axin2 proteinleri etkileşimlerinin "Proksimiti Ligasyon Assay (Yakınsal Bağlanma Tespiti)" ile görüntülenmesi

Yazarlar: Yücel ERBİLGİN | Özden HATIRNAZ | Müge SAYİTOĞLU | Ola SÖDERBERG | Uğur ÖZBEK

Yayıncı: Istanbul University

Dergi: Journal of Experimental Medicine 2011 Vol.1 Issue 2, pp.24-27

Belge Tipi: Makale

Yayın Tarihi: 12/2011

Belge Dili: Türkçe

Document ID (Org No.): 2000429259

eISSN: 2667-5846

Sayı

Yazarlar:

Yücel ERBİLGİN | Özden HATIRNAZ | Müge SAYİTOĞLU | Ola SÖDERBERG | Uğur ÖZBEK

Yayıncı:

Istanbul University

Dergi:

Journal of Experimental Medicine 2011 Vol.1 Issue 2, pp.24-27

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

12/2011

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000429259

eISSN:

2667-5846