Solanum lycopersicum Ekspanzin (LeExp1) Geni İçeren Rekombinant Pichia pastoris Protein Ekspresyon Vektörünün Dizaynı ve Oluşturulması

Asliye KARAASLAN; Mehmet KARAASLAN; Hasan VARDİN

Makale detayları

Solanum lycopersicum Ekspanzin (LeExp1) Geni İçeren Rekombinant Pichia pastoris Protein Ekspresyon Vektörünün Dizaynı ve Oluşturulması

Yazarlar:

Asliye KARAASLAN | Mehmet KARAASLAN | Hasan VARDİN

Yayıncı:

Harran University

Dergi:

Harran University Journal of Engineering 2017 Vol.2 Issue 1, pp.30-36

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

5/2017

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000465496

Sıklık:

Üç Yıllık

eISSN:

2528-8733

Özet:

 


Bu çalışmanın amacı rekombinant ekspanzin proteini üretim amacıyla kullanılacak olan LeExp1-pPIC9K vektörünün dizayn edilmesi
ve oluşturulmasıdır. Bu amaçla domates (Solanum lycopersicum) genomundan toplam RNA izole edilmiş ve spesifik primerler
vasıtasıyla RT-PZR yöntemiyle LeExp1 genine ait olan komplementer DNA (cDNA) sentezlenmiş ve çoğaltılmıştır. LeExp1 genine ait
cDNA pPIC9K vektörüne aktarılmadan önce EcoRI ve NotI restriksiyon enzimleriyle kesilmiş ve yine bu enzimlerle kesilmiş olan
pPIC9K vektörüne DNA ligaz enzimi kullanılarak eklenmiştir. Klonlama işlemi sonrasında hedef geni içeren vektör JM109 kompetent
E. coli hücrelerine ısı şoku uygulamasıyla transforme edilmiş ve antibiyotikli besiyerinde seçilim gerçekleştirilmiştir. Antibiyotik
pozitif olan tek kolonilerin hedef geni taşıyıp taşımadıkları koloni PZR yöntemiyle doğrulanmış ve E. coli hücrelerinden plazmid
DNA’ler ekstrakte edilmiştir. PZR sonuçlarına göre 918 baz çiftlik LeExp1 geninin vektör içerisindeki varlığı tespit edilmiş ve dizi
analizleriyle doğru nükleik asit sekansına sahip olduğu belirlenmiştir. Bu çalışmanın sonucunda moleküler analizler kullanılarak
rekombinant ekspanzin proteinin üretilebilmesi için gerekli olan vektörün doğru bir şekilde oluşturulduğu ortaya konulmuştur.

.

Makale detayları

Solanum lycopersicum Ekspanzin (LeExp1) Geni İçeren Rekombinant Pichia pastoris Protein Ekspresyon Vektörünün Dizaynı ve Oluşturulması

Yazarlar: Asliye KARAASLAN | Mehmet KARAASLAN | Hasan VARDİN

Yayıncı: Harran University

Dergi: Harran University Journal of Engineering 2017 Vol.2 Issue 1, pp.30-36

Belge Tipi: Makale

Yayın Tarihi: 5/2017

Belge Dili: Türkçe

Document ID (Org No.): 2000465496

Sıklık: Üç Yıllık

eISSN: 2528-8733

Sayı

Yazarlar:

Asliye KARAASLAN | Mehmet KARAASLAN | Hasan VARDİN

Yayıncı:

Harran University

Dergi:

Harran University Journal of Engineering 2017 Vol.2 Issue 1, pp.30-36

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

5/2017

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000465496

Sıklık:

Üç Yıllık

eISSN:

2528-8733