Kondroitin sülfat tayini için immünfloresan boyamalarda optimum fiksasyon yönteminin belirlenmesi

Duygu Yücel

Makale detayları

Kondroitin sülfat tayini için immünfloresan boyamalarda optimum fiksasyon yönteminin belirlenmesi

Yazarlar:

Duygu Yücel

Yayıncı:

Kocaeli University

Ana Başlıklar:

Biyokimya ve Hücre Biyolojisi (Diğer) | Anatomi

Dergi:

Acta Medica Nicomedia Vol.6 Issue 1, pp.44-48

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

2/2023

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2001284598

pISSN:

2717-8994

Anahtar kelimeler:

Özet:

 Amaç: Kondroitin sülfat KS zincirleri embriyonik hücre bölünmesi, sitokinez ve gelişimde rol oynayan, C. eleganstan fareye benzer rollerde görev alan moleküllerdir. KS moleküllerinin fonksiyonları kurtçuktan memeli sistemlere kadar korunmuştur. Doku ve hücrelere mekanik destek veren, nöronal plastisite ve hücre migrasyonunda görev alan KS moleküllerinin biyosentezi, C. elegansta insandakine benzer bir mekanizma ile gerçekleştirilmektedir. 40 yılı aşkın geçmişi ile sağladığı kaynaklar ve ikisi Fizyoloji ve Tıp alanında, biri Kimya alanında olmak üzere C. elegansı kullanan bilim insanlarının aldığı Nobel ödülleri ile C. elegans model organizması insan moleküler biyolojisini anlamak için eşsiz bir platformdur. C. elegans ve insan arasında birçok biyolojik işlev korunmuştur. İnsan hastalık genlerinin  65ine C. elegans genomunda bir karşılık bulunabilmektedir. Bu çalışmada, C. elegans model organizmasında kondroitin sülfat moleküllerinin immünfloresan boyama tekniği ile gözlemlenmesi için en etkin fiksasyon yönteminin belirlenmesi hedeflenmiştir. Yöntem: İmmünfloresan boyamaların gerçekleştirilmesi için embriyolar, erişkin C. elegans lardan izole edilmiş ve embriyo pelletleri 4 paraformaldehid PFA ve metanol ile fikse edilmek üzere iki farklı tüpe ayrıştırılmıştır. İnkübasyon ve yıkama aşamalarını takiben, örnekler, chondroitinase ABC CSase ABC enzimi ile muamele edilmiştir. Enzimin inaktive edilmesinin ardından 10 donkey serum ile bloke edilen embriyo pelletleri, primer antikor anti-chondroitin antibody anti-proteoglycan ΔDi-0S antibody 1B5, 1:20; Seikagaku ile gece boyu inkübe edilmiştir. Sekonder antikor olarak donkey anti-mouse Alexa 488 Life Technologies 1:250 oranında kullanılmış ve mikroskop preparatları hazırlanmıştır. Görüntüler inverted mikroskop kullanılarak elde edilmiştir. Bulgular: PFA ile yapılan boyamalarda, embriyonik katman yapılarının daha iyi korunduğu görülmüştür. Metanol ile fiksasyonun, embriyonik tabakaların yapısını bozduğu ve kondroitin boyamalarının başarısını düşürdüğü gözlemlenmiştir. Yapılan analiz ve karşılaştırmalarda, PFA ile yapılan fiksasyon aşamasının otofloresan sinyalini artırsa da, KS sinyalinin ve morfolojik yapısının tespiti için metanol ile yapılan fiksasyon yöntemine göre daha iyi sonuç verdiği gözlemlenmiştir. Sonuç: Bu çalışmada, KS tayini için en etkin yöntemin PFA fiksasyon yöntemi olduğu tespit edilmiştir. Böylece, PFA ile fiksasyon yöntemi kullanılarak, KS moleküllerine dair C. elegans model organizmasında fenotipik değişiklikler daha nitelikli ve yüksek doğrulukta analiz edilebilecektir.

 Amaç: Kondroitin sülfat KS zincirleri embriyonik hücre bölünmesi, sitokinez ve gelişimde rol oynayan, C. eleganstan fareye benzer rollerde görev alan moleküllerdir. KS moleküllerinin fonksiyonları kurtçuktan memeli sistemlere kadar korunmuştur. Doku ve hücrelere mekanik destek veren, nöronal plastisite ve hücre migrasyonunda görev alan KS moleküllerinin biyosentezi, C. elegansta insandakine benzer bir mekanizma ile gerçekleştirilmektedir. 40 yılı aşkın geçmişi ile sağladığı kaynaklar ve ikisi Fizyoloji ve Tıp alanında, biri Kimya alanında olmak üzere C. elegansı kullanan bilim insanlarının aldığı Nobel ödülleri ile C. elegans model organizması insan moleküler biyolojisini anlamak için eşsiz bir platformdur. C. elegans ve insan arasında birçok biyolojik işlev korunmuştur. İnsan hastalık genlerinin  65ine C. elegans genomunda bir karşılık bulunabilmektedir. Bu çalışmada, C. elegans model organizmasında kondroitin sülfat moleküllerinin immünfloresan boyama tekniği ile gözlemlenmesi için en etkin fiksasyon yönteminin belirlenmesi hedeflenmiştir. Yöntem: İmmünfloresan boyamaların gerçekleştirilmesi için embriyolar, erişkin C. elegans lardan izole edilmiş ve embriyo pelletleri 4 paraformaldehid PFA ve metanol ile fikse edilmek üzere iki farklı tüpe ayrıştırılmıştır. İnkübasyon ve yıkama aşamalarını takiben, örnekler, chondroitinase ABC CSase ABC enzimi ile muamele edilmiştir. Enzimin inaktive edilmesinin ardından 10 donkey serum ile bloke edilen embriyo pelletleri, primer antikor anti-chondroitin antibody anti-proteoglycan ΔDi-0S antibody 1B5, 1:20; Seikagaku ile gece boyu inkübe edilmiştir. Sekonder antikor olarak donkey anti-mouse Alexa 488 Life Technologies 1:250 oranında kullanılmış ve mikroskop preparatları hazırlanmıştır. Görüntüler inverted mikroskop kullanılarak elde edilmiştir. Bulgular: PFA ile yapılan boyamalarda, embriyonik katman yapılarının daha iyi korunduğu görülmüştür. Metanol ile fiksasyonun, embriyonik tabakaların yapısını bozduğu ve kondroitin boyamalarının başarısını düşürdüğü gözlemlenmiştir. Yapılan analiz ve karşılaştırmalarda, PFA ile yapılan fiksasyon aşamasının otofloresan sinyalini artırsa da, KS sinyalinin ve morfolojik yapısının tespiti için metanol ile yapılan fiksasyon yöntemine göre daha iyi sonuç verdiği gözlemlenmiştir. Sonuç: Bu çalışmada, KS tayini için en etkin yöntemin PFA fiksasyon yöntemi olduğu tespit edilmiştir. Böylece, PFA ile fiksasyon yöntemi kullanılarak, KS moleküllerine dair C. elegans model organizmasında fenotipik değişiklikler daha nitelikli ve yüksek doğrulukta analiz edilebilecektir.

 Amaç: Kondroitin sülfat KS zincirleri embriyonik hücre bölünmesi, sitokinez ve gelişimde rol oynayan, C. eleganstan fareye benzer rollerde görev alan moleküllerdir. KS moleküllerinin fonksiyonları kurtçuktan memeli sistemlere kadar korunmuştur. Doku ve hücrelere mekanik destek veren, nöronal plastisite ve hücre migrasyonunda görev alan KS moleküllerinin biyosentezi, C. elegansta insandakine benzer bir mekanizma ile gerçekleştirilmektedir. 40 yılı aşkın geçmişi ile sağladığı kaynaklar ve ikisi Fizyoloji ve Tıp alanında, biri Kimya alanında olmak üzere C. elegansı kullanan bilim insanlarının aldığı Nobel ödülleri ile C. elegans model organizması insan moleküler biyolojisini anlamak için eşsiz bir platformdur. C. elegans ve insan arasında birçok biyolojik işlev korunmuştur. İnsan hastalık genlerinin  65ine C. elegans genomunda bir karşılık bulunabilmektedir. Bu çalışmada, C. elegans model organizmasında kondroitin sülfat moleküllerinin immünfloresan boyama tekniği ile gözlemlenmesi için en etkin fiksasyon yönteminin belirlenmesi hedeflenmiştir. Yöntem: İmmünfloresan boyamaların gerçekleştirilmesi için embriyolar, erişkin C. elegans lardan izole edilmiş ve embriyo pelletleri 4 paraformaldehid PFA ve metanol ile fikse edilmek üzere iki farklı tüpe ayrıştırılmıştır. İnkübasyon ve yıkama aşamalarını takiben, örnekler, chondroitinase ABC CSase ABC enzimi ile muamele edilmiştir. Enzimin inaktive edilmesinin ardından 10 donkey serum ile bloke edilen embriyo pelletleri, primer antikor anti-chondroitin antibody anti-proteoglycan ΔDi-0S antibody 1B5, 1:20; Seikagaku ile gece boyu inkübe edilmiştir. Sekonder antikor olarak donkey anti-mouse Alexa 488 Life Technologies 1:250 oranında kullanılmış ve mikroskop preparatları hazırlanmıştır. Görüntüler inverted mikroskop kullanılarak elde edilmiştir. Bulgular: PFA ile yapılan boyamalarda, embriyonik katman yapılarının daha iyi korunduğu görülmüştür. Metanol ile fiksasyonun, embriyonik tabakaların yapısını bozduğu ve kondroitin boyamalarının başarısını düşürdüğü gözlemlenmiştir. Yapılan analiz ve karşılaştırmalarda, PFA ile yapılan fiksasyon aşamasının otofloresan sinyalini artırsa da, KS sinyalinin ve morfolojik yapısının tespiti için metanol ile yapılan fiksasyon yöntemine göre daha iyi sonuç verdiği gözlemlenmiştir. Sonuç: Bu çalışmada, KS tayini için en etkin yöntemin PFA fiksasyon yöntemi olduğu tespit edilmiştir. Böylece, PFA ile fiksasyon yöntemi kullanılarak, KS moleküllerine dair C. elegans model organizmasında fenotipik değişiklikler daha nitelikli ve yüksek doğrulukta analiz edilebilecektir.

 Amaç: Kondroitin sülfat KS zincirleri embriyonik hücre bölünmesi, sitokinez ve gelişimde rol oynayan, C. eleganstan fareye benzer rollerde görev alan moleküllerdir. KS moleküllerinin fonksiyonları kurtçuktan memeli sistemlere kadar korunmuştur. Doku ve hücrelere mekanik destek veren, nöronal plastisite ve hücre migrasyonunda görev alan KS moleküllerinin biyosentezi, C. elegansta insandakine benzer bir mekanizma ile gerçekleştirilmektedir. 40 yılı aşkın geçmişi ile sağladığı kaynaklar ve ikisi Fizyoloji ve Tıp alanında, biri Kimya alanında olmak üzere C. elegansı kullanan bilim insanlarının aldığı Nobel ödülleri ile C. elegans model organizması insan moleküler biyolojisini anlamak için eşsiz bir platformdur. C. elegans ve insan arasında birçok biyolojik işlev korunmuştur. İnsan hastalık genlerinin  65ine C. elegans genomunda bir karşılık bulunabilmektedir. Bu çalışmada, C. elegans model organizmasında kondroitin sülfat moleküllerinin immünfloresan boyama tekniği ile gözlemlenmesi için en etkin fiksasyon yönteminin belirlenmesi hedeflenmiştir. Yöntem: İmmünfloresan boyamaların gerçekleştirilmesi için embriyolar, erişkin C. elegans lardan izole edilmiş ve embriyo pelletleri 4 paraformaldehid PFA ve metanol ile fikse edilmek üzere iki farklı tüpe ayrıştırılmıştır. İnkübasyon ve yıkama aşamalarını takiben, örnekler, chondroitinase ABC CSase ABC enzimi ile muamele edilmiştir. Enzimin inaktive edilmesinin ardından 10 donkey serum ile bloke edilen embriyo pelletleri, primer antikor anti-chondroitin antibody anti-proteoglycan ΔDi-0S antibody 1B5, 1:20; Seikagaku ile gece boyu inkübe edilmiştir. Sekonder antikor olarak donkey anti-mouse Alexa 488 Life Technologies 1:250 oranında kullanılmış ve mikroskop preparatları hazırlanmıştır. Görüntüler inverted mikroskop kullanılarak elde edilmiştir. Bulgular: PFA ile yapılan boyamalarda, embriyonik katman yapılarının daha iyi korunduğu görülmüştür. Metanol ile fiksasyonun, embriyonik tabakaların yapısını bozduğu ve kondroitin boyamalarının başarısını düşürdüğü gözlemlenmiştir. Yapılan analiz ve karşılaştırmalarda, PFA ile yapılan fiksasyon aşamasının otofloresan sinyalini artırsa da, KS sinyalinin ve morfolojik yapısının tespiti için metanol ile yapılan fiksasyon yöntemine göre daha iyi sonuç verdiği gözlemlenmiştir. Sonuç: Bu çalışmada, KS tayini için en etkin yöntemin PFA fiksasyon yöntemi olduğu tespit edilmiştir. Böylece, PFA ile fiksasyon yöntemi kullanılarak, KS moleküllerine dair C. elegans model organizmasında fenotipik değişiklikler daha nitelikli ve yüksek doğrulukta analiz edilebilecektir.

Makale detayları

Kondroitin sülfat tayini için immünfloresan boyamalarda optimum fiksasyon yönteminin belirlenmesi

Yazarlar:

Duygu Yücel

Yayıncı:

Kocaeli University

Ana Başlıklar:

Biyokimya ve Hücre Biyolojisi (Diğer) | Anatomi

Dergi:

Acta Medica Nicomedia Vol.6 Issue 1, pp.44-48

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

2/2023

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2001284598

pISSN:

2717-8994

Kondroitin sülfat

fiksasyon yöntemi

C. elegans

immünfloresan boyama

ekstraselüler matriks

Sayı

Makale detayları

Kondroitin sülfat tayini için immünfloresan boyamalarda optimum fiksasyon yönteminin belirlenmesi

Yazarlar: Duygu Yücel

Yayıncı: Kocaeli University

Ana Başlıklar: Biyokimya ve Hücre Biyolojisi (Diğer) | Anatomi

Dergi: Acta Medica Nicomedia Vol.6 Issue 1, pp.44-48

Belge Tipi: Makale

Yayın Tarihi: 2/2023

Belge Dili: Türkçe

Document ID (Org No.): 2001284598

pISSN: 2717-8994

Kondroitin sülfat

fiksasyon yöntemi

C. elegans

immünfloresan boyama

ekstraselüler matriks

Sayı

Yazarlar:

Duygu Yücel

Yayıncı:

Kocaeli University

Ana Başlıklar:

Biyokimya ve Hücre Biyolojisi (Diğer) | Anatomi

Dergi:

Acta Medica Nicomedia Vol.6 Issue 1, pp.44-48

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

2/2023

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2001284598

pISSN:

2717-8994