Brucella melitensis dış membran protein geni Omp31’in klonlanması

Erman ORYAŞIN; Süheyla TÜRKYILMAZ

Makale detayları

Brucella melitensis dış membran protein geni Omp31’in klonlanması

Yazarlar:

Erman ORYAŞIN | Süheyla TÜRKYILMAZ

Yayıncı:

Van Yuzuncu Yıl University

Dergi:

Van Veterinary Journal 2019 Vol.30 Issue 2, pp.103-108

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

7/2019

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000680338

Sıklık:

Üç Yıllık

eISSN:

2149-8644

pISSN:

2149-3359

Özet:

 

Brucellosis is one of the most important zoonotic diseases transmitted
to humans from animals or animal products. Brucella
melitensis is the most pathogenic species in the genus brucella. The outer
membrane protein 31 (Omp31) of B.
melitensis is considered to be a protective immunogen and an important
candidate vaccine. In this study, cloning
from B. melitensis Rev 1 strain of Omp31
coding gene (omp31) was aimed. Brucella melitensis REV-1 live vaccine strain was used in the
study. After reactivation of strain, DNA was extracted from bacterial culture.
Gene sequence which encodes outer membrane protein was obtained from Gene Bank.
Primers were designed to clone this region. After primer design, the gene
region amplified by the polymerase chain reaction was cloned into the pET28a
expression vector and transformed into Escherichia
coli BL21 bacteria. Plasmid extraction was performed from E. coli BL21. The insert and plasmid were
separately observed as a result of cutting with the restriction enzyme used for
cloning. Expected size (790 bp) insert amplified with cloning primers again and
amplicon was sequenced. The sequence obtained after sequencing analysis was
compared to the gene bank and confirmed to be the outer membrane protein of B. melitensis. Further studies are
required to investigate the antigenic properties of the cloned recombinant
outer membrane protein Omp31 (rOmp31) and determine the potential to be a
candidate for vaccination.

 


Bruselloz hayvanlardan veya hayvansal ürünlerden insanlara bulaşan en
önemli zoonotik hastalıklardan birisidir. Brucella
melitensis, brusella cinsi içerisinde en patojen türlerden birisidir. B. melitensis'in dış membran proteini 31
(Omp31) koruyucu bir immünojen ve önemli bir aday aşı olarak kabul
edilmektedir. Bu çalışmada, B. melitensis
Rev 1 suşundan Omp31’i kodlayan genin (omp31)
klonlanması amaçlandı. Çalışmada materyal olarak B. melitensis REV-1 canlı aşı suşu kullanıldı. Suşun
canlandırılmasının ardından, DNA ekstraksiyonu yapıldı. Dış membran proteini
kodlayan gen bölgesi, gen bankasından bulundu. Bu bölgeyi klonlamak için
gerekli primerler manuel olarak dizayn edildi. Primer dizaynından sonra
polimeraz zincir reaksiyonu yoluyla çoğaltılan gen bölgesi, pET28a ekspresyon vektörüne
klonlanarak Escherichia coli BL21
bakterisine transformasyonu gerçekleştirildi. E. coli BL21’den plazmid ekstraksiyonu yapıldı. Klonlama için
kullanılan restriksiyon enzimi ile kesim sonucunda insert ve plazmid ayrı
olarak gözlemlendi. Beklenen büyüklükte (790 bp) bulunan insert, tekrar
klonlama primeri ile çoğaltılarak doğrulamak amacıyla sekans analizi yapıldı.
Sekans analizi sonrasında elde edilen dizi gen bankası ile karşılaştırıldı ve
insertin B. melitensis dış membran
proteini olduğu doğrulandı. Bundan sonraki yapılacak çalışmalarla da klonlanan
rekombinant dış membran proteini Omp31 (rOmp31)’in antijenik özelliğinin
araştırılarak aşı adayı olma potansiyelinin belirlenmesi gerekmektedir.

.

Makale detayları

Brucella melitensis dış membran protein geni Omp31’in klonlanması

Yazarlar: Erman ORYAŞIN | Süheyla TÜRKYILMAZ

Yayıncı: Van Yuzuncu Yıl University

Dergi: Van Veterinary Journal 2019 Vol.30 Issue 2, pp.103-108

Belge Tipi: Makale

Yayın Tarihi: 7/2019

Belge Dili: Türkçe

Document ID (Org No.): 2000680338

Sıklık: Üç Yıllık

eISSN: 2149-8644

pISSN: 2149-3359

Sayı

Yazarlar:

Erman ORYAŞIN | Süheyla TÜRKYILMAZ

Yayıncı:

Van Yuzuncu Yıl University

Dergi:

Van Veterinary Journal 2019 Vol.30 Issue 2, pp.103-108

Belge Tipi:

Makale

Yayın Tarihi:

7/2019

Belge Dili:

Türkçe

Document ID (Org No.):

2000680338

Sıklık:

Üç Yıllık

eISSN:

2149-8644

pISSN:

2149-3359